Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程里逐渐扩展

从第一次借助于现人体内自身特异性到借助于现1标准型哮喘针灸病征的成效数万人在学龄前末期就有不错的揭示，多个人体内自身特异性乙型肝炎的学龄前中所有70%在胰岛素转换后10年末患病哮喘，而随访15年的学龄前这一数量增大到84%。比起之下，占针灸1标准型哮喘一半以上的标准型1标准型哮喘的患病功能还没有取得充分的研究课题。

越来越多的人开始用作分期系统对来下定义1标准型哮喘的成效：个质在借助于现多种人体内自身特异性时转入第1下一阶段，借助于现低血糖异常时转入第2下一阶段，借助于现病征时转入第3下一阶段。一些多发人体内自身特异性乙型肝炎的个质，在1期和2期，成效速度更慢，并发展为患病的1标准型哮喘。我们之前揭示了一三组在首次样品到多种人体内自身特异性比对后至少10年无哮喘的极更慢成效者，这三组病征总人数少，但相似性非常明确。随后，我们断定人体内自身特异性特异性CD8+T细胞内重排在成效很更慢的病征中所基本不发挥作用，但在最近患病和一直发挥作用的哮喘病征中所很不易样品到。这显然断定，与成效病征比起，这些病征自身免疫重排的调节增强。

早期研究课题断定，尽管调节性T细胞内(Treg)生产量正常，但哮喘病征发挥作用一些功能性缺陷，其中所最主要对IL-2的重排能力也提高。此外，哮喘病征中所的畸变CD4+T细胞内显然对调节不具抵抗性，显出为畸变T细胞内的可抑制减弱，自然诱发的Treg和质外诱发的诱导Treg，以及特异性经历的CD4+T细胞内中所IL-2重排减弱。本研究课题的借此是揭示了CD4+调节性T细胞内(Treg)在大群极很更慢成效者中所的相似性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时长为18-32年。

作法：BOX研究课题是一项以许多人为基础的纵向研究课题，在21岁所列确诊的病征亲族中所检查1标准型哮喘的危险各种因素。我们之前揭示了一直很更慢成效者的相似性，他们保持多重人体内自身特异性乙型肝炎有约10年，但没有借助于现哮喘的针灸病征，更慢性或非展开性自身免疫。随后，10名之后保持无哮喘并愿意透过大量肝脏比对的很更慢成效者纳入T和B细胞内功能性量化。在现有的研究课题中所，8名更慢成效者(SP三组)，中所位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此之间的人体内自身特异性乙型肝炎。所有的发起者都处于1标准型哮喘成效的1期，尽管一些人随后失去了人体内自身特异性对某些特异性的乙型肝炎重排，然而，一名病征已经处于2期至少6年，但没有借助于现针灸病征，一名病征被诊断为哮喘，该受试者72岁，在野外实验室比对时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据量化中所对该小分姪展开了基本上检验。剥离外周血单个核细胞内(PBMCs)，采用多给定流式细胞内拳法和T细胞内可抑制试验检验小分姪中所Treg的频数万人、特异性和功能性。用作FlowSOM和CITRUS(聚类解剖、密切无关和重归)展开无委派聚类量化，检验Treg特异性。

结果：与健康小分姪比起，来自更慢成效质的无意识CD4+T细胞内的委派聚类揭示，可抑制的无意识CD4+ Treg频数万人增大，与低剂量诱导的TNFR无关复合物(GITR)解读增大有关。一名HbA1c升高的病征与成效很更慢者和意味着的对照三组比起，Treg谱有所相异。功能性量化断定，与健康小分姪比起，来自很更慢成效质的Treg介导的CD4+畸变T细胞内可抑制相对来说受损。显出为对畸变CD4+T细胞内CD25和CD134解读的可抑制增大。

所示1 险恶的特异性量化揭示，CD4+Treg亚标准型在更慢成效揭示符中所增大。由FlowSOM生成的Treg三楼，聚集在来自所有小分姪的光阴CD4+CD45RA -细胞内上。根据标明物解读解剖借助于10个元簇:无意识T细胞内_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T细胞内;HLA-DR + GITR +无意识T细胞内;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)用作9个相异Treg标明生成的10个元簇的MST。每个键值代表一个战略性(100个战略性)，越来越大的元战略性(10个元战略性)在键值三组一处上色。每个键值中所的饼所示回应单个标明的解读级别。(b)每个元聚类的热所示，以揭示基本标明解读。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)生成所示，以及FlowSOM识别的每个元簇的沙质。(e-l)比起较金属量为每个metacluster箱内直通所示(金属量> 0.05%)确定为HD和SP三组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T细胞内(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T细胞内(l)。红色格子代表这些年来SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 用作CITRUS的预测模标准型证实，Treg频数万人的增大是成效很更慢的标识。分级奈斯(a - f)和柑橘量化(g-k)比较SP发起者和意味着的HD发起者在CD4+CD45RA−T细胞内上的关联。(a)子代CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l许多人的代表性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读展开剥离，模拟FlowSOM许多人。(b) HD(黑斑)和SP(斑点)三组以及小分姪SP 606(红色)中所CD25+ cd127的频数万人概述所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯姪集的箱内直通所示;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)柑桔簇球状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读风速纹理，箭头突借助于的簇被识别为SP和HD揭示符彼此之间的相异。(j)箱内直通所示揭示了在SP(斑点)和HD(灰点)三组中所，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的比起较金属量(数量)。(k)直方所示揭示每个簇的特异性(粉红色)和Treg标明比起较解读与取材解读(黄色);上列，寄存器Treg_3;下面一行，寄存器Treg_4。取材与所有其他簇中所标明的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

所示3 与健康献血者比起，成效很更慢者无意识treg的GITR增大。每个无意识CD4+T细胞内元簇(无意识T细胞内_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T细胞内;HLA-DR + GITR +无意识T细胞内;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个解读标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)揭示符的解读热所示(sp606不最主要在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇中所所有HD(棕色)、所有SP(黄色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR解读串连，揭示直方所示(c)和概述所示(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(红色)所有小分姪最主要，p< 0.05(黄色)小分姪SP 606和意味着的HD不最主要在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR解读，从分级奈斯，从所有HD(棕色)、所有SP(黄色)和SP 606(红色)串连，揭示直方所示(e)和概述所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

所示4 来自很更慢成效的CD4+ treg细胞内控制畸变CD4+T细胞内的能力也提高。SP三组用黄色的直通和格子回应，HD三组用红色的直通和格子回应，红色的直通/格子回应小分姪sp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内展开分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标明为CFSE, Treg按通过观察的数量滴定。用抗CD3 /28微珠诱导细胞内，人才培养3同一天展开流式细胞内拳法样品。(a-d)与CD4+反之亦然者比起较应的treg人才培养(暂时性)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者人才培养。(a,b,f) CFSE细胞分裂(a,e)和CFSE可抑制总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制总和。用作乙型肝炎对照(可抑制的响应细胞内不含treg)数值可抑制总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 畸变CD4+T细胞内对很更慢成效的T细胞内诱导的可抑制越来越敏感。SP三组用黄色的直通和格子回应，HD三组用红色的直通和格子回应，红色的直通/格子回应小分姪sp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内展开分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标明，treg按通过观察的数量滴定。用抗CD3 /28微珠诱导细胞内，人才培养3同一天展开流式细胞内拳法(CD25反染)和细胞内因姪量化。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者共同完成人才培养。(a,b) CFSE细胞分裂(a)和CFSE可抑制百分数万人(b)。(c,d) CD25可抑制百分数万人(c)和CD134可抑制百分数万人(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养中所的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得借助于的结论是，来自很更慢成效姪的诱导无意识CD4+Treg在GITR解读中所取得了扩充和丰沛，强调了进一步研究课题Treg在1标准型哮喘风险个质中所的异质性的必要性。

原文借助于处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28